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組織培養中光照也是重要的條件之一，主要表現在光強、光質、以及光照時間方面：

1、光照強度（light intensity)

光照強度對培養細胞的增殖和器官的分化有重要影響，從目前的研究情況看，光照強度對外植物體、細胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說，光照強度較強，幼苗生長的粗壯，而光照強度較弱幼苗容易徒長。

2、光質（light wave)

光質對愈傷組織誘導，培養組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。如百合珠芽在紅光下培養，8周后，分化出愈傷組織。但在藍光下培養，幾周后才出現愈傷組織，而唐菖蒲子球塊接種15天后，在藍光下培養首先出現芽，形成的幼苗生長旺盛，而白光下幼苗纖細。

3、光周期（light period)

試管苗培養時要選用一定的光暗周期來進行組織培養，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，對短日照敏感的品種的器官組織，在短日照下易分化，而在長日照下產生愈傷組織，有時需要暗培養，尤其是一些植物的愈傷組織在暗培養下比在光下更好。如紅花、烏飯樹的愈傷組織。